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戊乙奎醚对内毒素致新生大鼠肠损伤时缺氧诱导因子-1α及谷氨酰胺表达的影响

时间:2021-11-26 13:00:01 来源:yb亚博登录平台 点击:

本文摘要:概要新生儿肠受损是儿科少见的疾病之一,其再次发生的主要原因有早产、窒息而死引发的坏死氧气以及病毒感染等。其中相当严重病毒感染经常可造成危重患儿胃肠功能中风。肠道在全身炎症反应综合征(SIRS)和多器官功能障碍综合征(MODS)的再次发生发展过程中扮演着极其重要的角色。 肠道感染或坏死氧气不会造成肠粘膜屏障功能损毁,引发细菌及内毒素的移位,引起败血症和脓毒性休克,从而更进一步减轻肠的组织的受损,甚者可预示远隔器官累及。LPS作为典型的内毒素,可所致内毒素血症,造成肠黏膜损害。

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概要新生儿肠受损是儿科少见的疾病之一,其再次发生的主要原因有早产、窒息而死引发的坏死氧气以及病毒感染等。其中相当严重病毒感染经常可造成危重患儿胃肠功能中风。肠道在全身炎症反应综合征(SIRS)和多器官功能障碍综合征(MODS)的再次发生发展过程中扮演着极其重要的角色。

肠道感染或坏死氧气不会造成肠粘膜屏障功能损毁,引发细菌及内毒素的移位,引起败血症和脓毒性休克,从而更进一步减轻肠的组织的受损,甚者可预示远隔器官累及。LPS作为典型的内毒素,可所致内毒素血症,造成肠黏膜损害。

国内外诸多研究找到氧气诱导因子-1α(HIF-1α)和谷氨酰胺(Gln)在内毒素性肠受损的病理转变过程中具备最重要起到。盐酸戊乙奎醚(PHC)是我国自律研制的抗胆碱药。

研究指出,盐酸戊乙奎醚因能提高微循环、减少毛细血管壁通透性和增加溶酶体获释而具备多器官维护起到。目前盐酸戊乙奎醚对内毒素性肺损伤的维护起到获得了普遍地证实和接纳,我们通过大量的临床仔细观察找到盐酸戊乙奎醚在中止肠痉挛、减低肠道水肿方面某种程度具备较好的效果。基于以上背景,本课题目的研究内毒素致新生大鼠肠受损时盐酸戊乙奎醚预先给药对肠的组织HIF-1α和Gln传达的影响,以及对其肠维护起到机制展开可行性探究。

目的探究盐酸戊乙奎醚预先给药对内毒素致新生大鼠肠受损时HIF-1α和Gln传达的影响及其肠维护起到涉及机制,为临床预防新生儿肠受损获取一条新的思路。材料与方法1.研究对象60只SPF级身体健康新生7日龄SD大鼠,由郑州大学河南省实验动物中心获取,雌雄不缩,体重18±2g。

2.实验方法2.1实验动物分组本实验分成两部分。第一部分:将30只幼鼠随机分成3两组,每组10只。分别为对照组(C两组)、肠受损模型组(L两组)和盐酸戊乙奎醚介入组(P两组),借以测量肠的组织滑/干重比、仔细观察肠的组织形态学的转变和检测肠的组织中细胞因子的传达。第二部分:30只幼鼠某种程度随机分成3两组,C两组4只,L组和P组各13只,借以仔细观察造模后幼鼠行为学的变化并计算出来每组24h生存率。

2.2动物模型的制取肠受损模型组腹腔静脉注射内毒素(细菌脂多糖LPS,E.Coli055:B5,Sigma公司,美国)5mg/kg,提炼浓度为0.5mg/ml;盐酸戊乙奎醚介入组在静脉注射内毒素前30min,再行腹腔静脉注射盐酸戊乙奎醚(成都力思特制药股份有限公司,批号:120603)2mg/kg,提炼浓度为0.05mg/ml;对照组腹腔静脉注射生理盐水10ml/kg。第一部分实验于腹腔静脉注射内毒素或生理盐水后6h麻醉并解剖学幼鼠。两部分实验皆在造模已完成后将幼鼠取出鼠笼与母鼠联合喂食。

2.3肠的组织的标本收集在密封玻璃容器中排出七氟烷较慢麻醉幼鼠后,将其相同于操作台,解剖学,用1ml注射器很快心脏采血,静置2小时,4℃下4000r/min离心15分钟,所取上清液,-20℃冰箱中留存待检。距回盲部3cm向下所取结肠的组织7cm,4℃生理盐水冲洗肠管3遍,滤纸吸干肠的组织表面水分后,将7cm结肠的组织分成4段。

上段1cm用作光镜下形态学仔细观察,中上段2cm用作测量肠的组织湿重和干重,中下段2cm用作制取肠的组织匀浆,下段2cm用作RT-PCR检测肠的组织HIF-1αmRNA的传达。2.4检测指标2.4.1计算出来肠的组织滑/干重比(W/D)电子称重计秤中上段2cm结肠的组织并记录湿重,随后放进70℃恒温浸泡箱浸泡48h至重量仍然发生变化,测量干重,计算出来滑/干重比。2.4.2肠的组织形态学仔细观察将上段1cm结肠的组织放进4%多聚甲醛中留存待检。

石蜡包埋后制作4μm病理切片,行HE染色。400倍光镜下仔细观察结肠的组织粘膜上皮细胞形态学的转变。2.4.3ELISA法测定肠的组织中TNF-α、IL-6、HIF-1α、Gln、二胺氧化酶(DAO)及血清DAO的含量中下段2cm结肠的组织除去后制取的组织匀浆,4℃下3000r/min离心15分钟,所取上清液,置放-20℃冰箱留存待检。TNF-α、IL-6、HIF-1α、Gln和DAO的检测严苛按照ELISA试剂盒(R&D公司,美国)说明书展开。

2.4.4RT-PCR法测定肠的组织HIF-1αmRNA的传达将下段2cm结肠的组织经DEPC水冲净后滤纸吸干,很快经液氮加热后放进冷存管中,置放-80℃冰箱留存待检。经肠的组织总RNA的萃取、逆转录、DNA扩充和琼脂糖凝胶电泳等步骤检测幼鼠肠的组织HIF-1αmRNA的传达情况。3.统计学处置使用SPSS17.0统计资料软件包展开统计学分析,计量资料以均数±标准差(±s)回应,多组间较为使用单因素方差分析,两两较为使用大于明显差异法(LSD-t),以α=0.05为检验水准,P。


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